BIO K 266 Monoscreen AgELISA Clostridium perfringens alpha toxin / sandwich, double wells
Тест-система Моноскрин для антигенной диагностики Clostridium perfringens alpha toxin в супернатантных культурах и биологических жидкостях сэндвич методом ИФА всех видов животных
Артикул: | BIO K 266 |
Формат теста: | 2 планшета, 96 тестов |
Разновидность: | Все виды |
Матрица: | Культуральные супернатанты и биологические жидкости |
Метод анализа: | Сэндвич ИФА, двойные лунки |
Monoscreen AgELISA Clostridium perfringens theta toxin | 2 х 96 тестов | BIO K 266/2 |
Недавние масс-спектрометрические анализы позволили нам продемонстрировать, что моноклональное антитело, используемое в BIOK266, специфично не для альфа-токсина, а для тета-токсина и протеазы. Поскольку тета-токсин почти всегда связан с альфа-токсином, цель этого диагностического набора для энтеротоксемия не зависит от этого аналитического прогресса. Более того, тета-токсин менее чувствителен к действию протеаз, чем альфа-токсин, и поэтому является более чувствительным маркером Clostridium perfringens.
В тесте используются 96-луночные планшеты для микротитрования, сенсибилизированные специфическими поликлональными антителами к альфа-токсину. Эти антитела позволяют специфически захватывать соответствующий антиген, присутствующий в образцах. Этими антителами сенсибилизированы нечетные ряды A, C, E, G, а четные ряды B, D, F, H содержат неспецифические антитела. Эти контрольные ряды позволяют различать специфическую иммунологическую реакцию и неспецифическое связывание. Биологические образцы (например: содержимое тонкой кишки, перитонеальная жидкость….) разводят в буфере для разведения и инкубируют на микропланшете в течение 1 часа при 21°С +/- 3°С. Супернатанты культур используют без разбавления. После этой первой стадии инкубации планшет промывают и инкубируют в течение 1 часа с конъюгатом – моноклональным антителом, специфичным к альфа-токсину, меченым пероксидазой. После этой второй инкубации планшет снова промывают и добавляют хромоген (тетраметилбензидин). Преимущество этого хромогена в том, что он более чувствителен, чем другие хромогены пероксидазы, и не является канцерогенным. При наличии в тестируемых образцах альфа-токсина конъюгат остается связанным с соответствующими микролунками, а фермент катализирует превращение бесцветного хромогена в пигментированное соединение. Интенсивность полученного синего цвета пропорциональна титру альфа-токсина в образце. Ферментативную реакцию можно остановить подкислением, а результирующую оптическую плотность при 450 нм можно зарегистрировать с помощью фотометра. Значения, полученные для микролунок отрицательного контроля, вычитают из соответствующих микролунок положительного контроля. В наборе есть положительный антиген.