Часто задаваемые вопросы при проведении ИФА анализа пищевой продукции

Часто задаваемые вопросы:

1. Отсутствует окрашивание или стандарты не определяются
2. Низкие показатели оптической плотности
3. Высокие фоновые показатели или высокие показатели оптической плотности (ОП)
4. Высокая вариабельность показателей в одном планшете
5. Высокая вариабельность показателей в разных планшетах
6. Одна или несколько точек на кривой стандарта выходят за допустимые пределы

 

Отсутствует окрашивание или стандарты не определяются

Причина	Рекомендуемые действия
Реагенты были использованы в неправильном порядке или какой-то этап был пропущен	Повторите анализ, тщательно соблюдая требования протокола
Были использованы неподходящие антитела	Убедитесь, что используете именно те антитела, которые входили в состав набора. Все пероксидазные конъюгаты являются специфичными для данного набора и партии
Субстрат TMБ испортился	Используйте субстрат TMБ из нового набора

Низкие показатели оптической плотности

Причина	Рекомендуемые действия
У реагентов истек срок годности или были смешаны реагенты из разных партий	Проверьте сроки годности и номера партии
Промывочный раствор был приготовлен неправильно	Используйте промывочный раствор, предназначенный для данного набора, и убедитесь, что он был приготовлен правильно
Было проведено слишком много промывочных циклов	Убедитесь, что количество промываний соответствует инструкции, предусмотренной протоколом
Длительность инкубации была недостаточной	Убедитесь в точности определения длительности инкубации для каждого планшета в отдельности, следуйте требованиям протокола
Температура в лаборатории была слишком низкая	Поддерживайте в лаборатории комнатную температуру (20–25°С). Не выполняйте анализы под воздушными вентиляторами или вблизи холодных окон
Реагенты и планшеты были слишком холодными	Убедитесь, что планшеты и реагенты имеют комнатную температуру. Достаньте компоненты набора из упаковки не менее чем за 1 час до начала проведения анализа
У считывающего устройства была установлена неправильная длина волны, или ридер работал неправильно	Убедитесь, что длина волны составляет 450 нм, и снимите показания еще раз. Проверьте калибровку считывающего устройства и настройку лампы
Набор ИФА подвергся излишнему воздействию	Проверьте записи о том, сколько раз набор доставали из холодильника. Проверьте, не оставался ли набор при экстремальной температуре слишком долго
Планшеты подверглись воздействию	Всегда помещайте планшеты в холодильник в запечатанных пакетах с влагопоглотителем для поддержания стабильности. Не допускайте образования на планшетах, находящихся в упаковке, конденсата, при выдерживании их при комнатной температуре (20–25°С)

Высокие фоновые показатели или высокие показатели оптической плотности (ОП)

Причина	Рекомендуемые действия
В промывочном растворе использована вода плохого качества	Если качество воды вызывает сомнения, постарайтесь при приготовлении промывочного раствора использовать дистиллированную воду из другого источника
Раствор субстрата испортился	Убедитесь, что субстрат бесцветный, перед добавлением его в планшет
Было проведено недостаточное количество промывочных циклов или промывка была выполнена плохо	Количество промываний должно соответствовать инструкции, предусмотренной протоколом. Убедитесь, что в каждую лунку планшета попадает не менее 250 мкл промывочного раствора. Проверьте работу промывочной системы; отремонтируйте систему, если отмечаются протекания, плохое разбрызгивание или всасывание
Считывающее устройство работало плохо или не было откалибровано. Вероятность этого велика, если показатели ОП высокие, а окраска бледная	Проверьте работу считывающего устройства, используя калибровочный планшет, проверьте настройку лампы. Проверьте процедуру выведения спектрофотометра на нулевой уровень, а при необходимости – повторите ее
Температура в лаборатории была слишком высокая	Поддерживайте в лаборатории комнатную температуру (20 –25°С). Не выполняйте анализы вблизи нагревательных приборов или под прямыми солнечными лучами
Реагенты были перемешаны, загрязнены или неправильно приготовлены	Убедитесь, что были использованы соответствующие реагенты, рабочие растворы приготовлены правильно, не произошло загрязнения

Высокая вариабельность показателей в одном планшете

Причина	Рекомендуемые действия
Стандарты, реагенты или пробы были добавлены в планшет для анализа в неправильные сроки	Убедитесь, что все материалы подготовлены, и их можно использовать. Используйте многоканальный дозатор для одновременного внесения реагентов в лунки, где это возможно. Не делайте перерывов во время внесения стандартов, реагентов и проб
Была проведена недостаточная промывка или промывочная система работала плохо	Проверьте работу промывочной системы. Отремонтируйте систему, если отмечаются протекания, плохое разбрызгивание или всасывание
Многоканальный дозатор работал плохо	Проверьте калибровку дозатора и убедитесь, что наконечники держатся крепко. Убедитесь, что все каналы дозатора набирают и высвобождают одинаковые объемы жидкости

Высокая вариабельность показателей в разных планшетах

Причина	Рекомендуемые действия
В разных планшетах затрачено разное время на инкубацию	Устанавливайте длительность инкубации для каждого планшета в отдельности
В разных планшетах по-разному выполнено промывание	Убедитесь, что количество промываний соответствует инструкции, предусмотренной протоколом. Проверьте работу промывочной системы, отремонтируйте систему, если отмечаются протекания или плохое разбрызгивание/всасывание
Дозатор работал неправильно	Проверьте калибровку дозатора. Перед использованием дозатора убедитесь, что наконечники держатся крепко, и что все каналы дозатора набирают и высвобождают одинаковые объемы жидкости
Использованные реагенты были взяты из наборов из разных партий или наборы были с разными сроками годности	Аккуратно обозначьте все реагенты, чтобы их не перепутать. Диапазон значений оптической плотности реагентов из наборов, имеющих разный срок годности, может отличаться. Тем не менее, значения относительной оптической плотности можно сопоставить. Как правило, значение нулевого стандарта меньше 0,6 может указывать на некоторое ухудшение качества реагентов
Планшеты, реагенты, стандарты и пробы хранились при разных температурах	Убедитесь, что планшеты, реагенты, стандарты и пробы достигли комнатной температуры (20 – 25°С). Большим объемам понадобится больше времени для достижения комнатной температуры. Если для ускорения процесса используется водяная баня, убедитесь, что в ней поддерживается комнатная температура; не используйте для подогрева реагентов, проб и стандартов набора теплую воду

Одна или несколько точек на кривой стандарта выходят за допустимые пределы

Причина	Рекомендуемые действия
Стандарты добавляли в неправильном порядке или регистрацию осуществляли в неправильных позициях	Устанавливайте длительность инкубации для каждого планшета в отдельности
Стандарты были загрязнены или смешаны с другими стандартами	Используйте стандарты из нового набора. Вносите стандарты в планшет только в порядке повышения концентрации
Была проведена недостаточная промывка или промывочная система работала плохо	Выполните промывание правильно. Проверьте работу промывочной системы. Отремонтируйте систему, если отмечаются протекания или плохое разбрызгивание/всасывание
Стандарты и реагенты были добавлены в планшет в неправильные сроки	Убедитесь, что все материалы подготовлены и их можно использовать. Вносите в планшет стандарты непрерывно и только в порядке повышения концентрации. Используйте многоканальный дозатор для одновременного заполнения нескольких лунок
Дозатор работал неправильно	Проверьте калибровку дозатора и убедитесь, что наконечники держатся крепко. Убедитесь, что все каналы дозатора набирают и высвобождают одинаковые объемы жидкости

Техническая поддержка
+7 499 704 05 50
support@neo-test.ru
Менеджер 24/7: +375 29 664 60 19 – Viber, Telegram, WhatsApp