BIO K 275 Monoscreen AgELISA SVCV / sandwich, double wells
Набор для ИФА сэндвич-типа для антигенной диагностики вируса весенней виремии карпа
Артикул: | BIO K 275 |
Формат теста: | 96 тестов |
Разновидность: | Рыба |
Метод анализа: | Сэндвич ИФА, двойные лунки |
Monoscreen AgELISA SVCV / sandwich, double wells | BIO K 275/1 | снят с производства |
BIO K 275/2 | 2 х 48 тестов |
Зараженные экземпляры растирают в ступке с помощью песка, затем помещают в раствор питательной среды с добавлением антибиотиков. Также можно использовать гастер или блендер. Препарат центрифугируют и 24-луночный планшет для культивирования клеток инокулируют серийными разведениями супернатанта. Через 1 час инкубации при оптимальной температуре в каждую лунку добавляют питательную среду и планшет инкубируют до появления цитопатогенного эффекта. В этот момент пластина застывает. Он готов к тестированию методом ИФА. В тесте используются 96-луночные планшеты для микротитрования, сенсибилизированные специфическими антителами к вирусу SVC. Ряды A, C, E, G были сенсибилизированы этими антителами, а ряды B, D, F, H содержат неспецифические антитела. Эти контрольные ряды позволяют различать специфические иммунологические реакции и неспецифическое связывание, чтобы исключить ложноположительные результаты.
Супернатанты инкубируют на микропланшете в течение 1 часа при 21°С +/- 3°С.
После этой первой стадии инкубации планшет промывают и инкубируют в течение 1 часа с конъюгатом, меченым пероксидазой моноклональным антителом против SVCV. После этой второй инкубации планшет снова промывают и добавляют хромоген (тетраметилбензидин). Этот хромоген имеет то преимущество, что он более чувствителен, чем другие хромогены пероксидазы, и не является канцерогенным. Если SVCV присутствует в супернатанте клеточной культуры, конъюгат остается связанным с соответствующими микролунками, а фермент катализирует превращение бесцветного хромогена в пигментированное соединение. Интенсивность полученного синего цвета пропорциональна титру SVCV в супернатанте. Ферментативную реакцию можно остановить подкислением и полученную оптическую плотность при 450 нм записывают с помощью фотометра. Сигналы, записанные для микролунок отрицательного контроля, вычитают из соответствующих микролунок положительного контроля. Положительный контрольный антиген поставляется с набором для подтверждения результатов теста.